羥自由基清除率檢測試劑盒(Fenton微板法)

一、產(chǎn)品簡介：

在生命活動(dòng)的代謝過程中不斷產(chǎn)生各種自由基，其中羥自由基·OH是體內(nèi)的活性氧，可介導(dǎo)許多生理變化，羥自由基作用于體內(nèi)蛋白質(zhì)、核酸、脂類等生物分子，造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能受損，進(jìn)而導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂引起疾病，如引發(fā)不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，并損傷膜結(jié)構(gòu)和功能。羥自由基清除能力是樣品抗氧化能力的重要指標(biāo)之一，在抗氧化類保健品和藥品研究中得到廣泛應(yīng)用。

雅吉生物羥自由基清除率檢測試劑盒(Fenton微板法)又稱羥自由基清除能力檢測試劑盒或羥自由基檢測試劑盒，其檢測原理是H2O2/Fe2+ 通過 Fenton 反應(yīng)產(chǎn)生羥自由基，并將Fe2+氧化為Fe3+，導(dǎo)致紅色的鄰二氮菲-Fe2+氧化為無色的鄰二氮菲-Fe3+，使鄰二氮菲-Fe2+在536nm處的最大吸收峰消失，可通過酶標(biāo)儀測定530~540nm處吸光度的變化，據(jù)此可計(jì)算出羥自由基的含量變化，即可計(jì)算出樣品的羥自由基清除率或清除能力。該試劑盒主要用于植物組織、血清、血漿等樣本。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

二、產(chǎn)品組成：

三、自備材料：

1、蒸餾水

2、實(shí)驗(yàn)材料：植物組織(芹菜、綠豆、玉米等葉片)、血液、組織樣本等

3、研缽或勻漿器

4、離心機(jī)、離心管或試管

5、水浴鍋

6、酶標(biāo)儀、96 孔板

四、操作步驟(僅供參考)：

1、準(zhǔn)備樣品：

①植物樣品：取正常或逆境下的新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱取，按1~1.5g 樣品：4.5ml 蒸餾水的比例勻漿或研磨，室溫靜置 4h，3000g 離心 30min，上清液即為羥自由基粗提液，4℃保存?zhèn)溆谩?亦可參考相關(guān)資料提取方法提取)

②血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，4℃保存，用于羥自由基的檢測。

③高活性樣品：如果樣品中含有較高濃度的羥自由基，可用蒸餾水進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、·OH加樣：按照下表設(shè)置空白管、未損傷管、損傷管、對照管、測定管，溶液應(yīng)按照順序依次加入，然后，置各管于 37℃水浴鍋保溫 1h。如果樣品中的羥自由基(·OH)濃度過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，樣品的檢測最好能設(shè)置平行管。

3、·OH 測定：取96孔板，將各管溶液依次吸取300ul加至96孔板中，用酶標(biāo)儀檢測530~540nm處各孔吸光度值，依次記為A0、A1、A2、A3`、A3。

五、計(jì)算：

組織樣品·OH 清除率(%)=[(A3- A3`)-( A2- A0)]/[ (A1- A0)-( A2- A0)]×100

=[(A3- A3`)-( A2- A0)]/(A1-A2)×100

備注：A0=空白管的吸光度值

A1=未損傷管的吸光度值

A2=損傷管的吸光度值

A3`=對照管的吸光度值

A3=測定管的吸光度值

六、注意事項(xiàng)：

1、 實(shí)驗(yàn)材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不能立即檢測，應(yīng)存于 4℃。

2、 測定過程中的干擾因素較多，容易對測定的準(zhǔn)確性和靈敏度造成影響。

3、 水浴的溫度和時(shí)間應(yīng)一致。

4、 如果沒有分光光度計(jì)，也可以使用普通的酶標(biāo)儀測定，但應(yīng)考慮酶標(biāo)儀的最大檢測體積。 

5、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

七、有效期：6 個(gè)月有效。4℃運(yùn)輸，4℃保存。