蛋白酶抑制劑混合物A（100X）試劑貨號產(chǎn)品名稱組分?jǐn)?shù)量保存溫度用途

S0143蛋白酶及磷酸酶抑制劑混合物ABC（100X）蛋白酶抑制劑混合物A（100X）100 μl用于非磷酸及磷酸化蛋白的研究

磷酸酶抑制劑混合物B（100X）100 μl

磷酸酶抑制劑混合物C（100X）100 μl

蛋白酶及磷酸酶抑制劑組分及抑制性能

 蛋白酶抑制劑混合物A磷酸酶抑制劑混合物B磷酸酶抑制劑混合物C

組 分104mM AEBSF

80μM Aprotinin

5mM Bestatin

1.5mM E-64

2mM Leupeptin

1.5mM Pepstatin A100mM Sodium Fluoride

100mM Sodium Orthovanadate

400mM Sodium Tartrate

115mM Sodium Molybdate

200mM Imidazole2.5mM (-)-p-Bromotetramisole oxalate

500μM Cantharidin

500nM Microcystin LR, Microcystis aeruginosa

抑制蛋白酶種類Serine

Aminopeptidases Cysteine

Aspartic proteasesAcid phosphatases

Alkaline phosphatases

PTPs, ATPases,

Acid phosphatases

Acid and phosphoprotein

Alkaline phosphatasesAlkaline phosphatases

Ser/Thr phosphatases

PP1 and PP2A

根據(jù)試驗情況推薦選擇組合

試 驗 類 型組合類型選擇

Western Blot雜交，非磷酸化蛋白C2501＋S0142

Western Blot雜交，非磷酸化及磷酸化蛋白C2501＋S0143

Co-IP/IP試驗，非磷酸化蛋白C1901＋S0142

Co-IP/IP試驗，非磷酸化及磷酸化蛋白C1901＋S0143

單獨分離細(xì)胞核蛋白和胞漿蛋白C2601＋S0143

使用方法

A: 非磷酸化蛋白的提取：在使用前數(shù)分鐘內(nèi)向WB Super RIPA裂解液中，加入蛋白酶抑制劑混合物A (S0142)，使其最終濃度為1×。如250μl WB Super RIPA裂解液，加入2.5μl蛋白酶抑制劑混合物A，混合均勻，進行后續(xù)樣品裂解和蛋白提取。

B: 磷酸化蛋白的提取：在使用前數(shù)分鐘內(nèi)向WB Super RIPA裂解液中，加入蛋白酶抑制劑混合物A 、磷酸酶抑制劑混合物B 、磷酸酶抑制劑混合物C (S0143)各2.5μl，使其最終濃度為1×。如250μl WB Super RIPA裂解液，加入2.5μl蛋白酶抑制劑混合物A、2.5μl磷酸酶抑制劑混合物B 、2.5μl磷酸酶抑制劑混合物C，混合均勻，進行后續(xù)樣品裂解和蛋白提取。

蛋白酶抑制劑混合物A（100X）試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達(dá)平臺期)。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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